大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于引物设计网站的问题，于是小编就整理了5个相关介绍引物设计网站的解答，让我们一起看看吧。
primerpremier设计引物如何保存？
设计好后，点左上角的“edit”，再点“copy”，然后选择正向引物或反向引物，点击后就已经复制到剪切板里了。然后打开word、txt或者exel文件，直接ctrl+V粘贴即可。 ———————————————————————— save to database是存入了PP5自己的数据库中。就像这样： 然后你在下面选中你的引物，点export，就存进了数据库中，然后你可以编辑名字之类的。 不懂的话继续问。
primer怎么看引物有没有发卡结构？
的方法如下：
打开Primer Premier
5.0在线网页进行设计引物。
输入序列（目的基因的CDS的核酸序列）。
进行产物长度、引物大小等的设定。
点击pick primers后得到结果。
利用DNAMAN检测引物是否存在发卡结构。打开DNAMAN软件，点击primer-Load primer-From Input，输入Forward引物；点击Primer-Two Primer Complementarity-Second primer From Input，即可查看引物能否形成发卡结构。检测结果（一般选择少于四个发卡结构的引物）。
满足条件的即可确定为比较好的qPCR引物，发送至公司邮箱合成即可。
引物设计中sense primer和anti-sense primer是什么意思？
sense primer 正义链引物，可当作上游引物anti-sense primer 反义链引物，可当作下游引物这个一般是在rna干扰中用的primer的说法，这2条引物大部分是互补的。
怎样在NCBI的primer blast里设计Q-PCR的引物？
方法/步骤
1、首先打开NCBI，选择“Nucleotide”，并在搜索框输入基因名。一般用目标基因的突变体1去设计引物，也就是要选择目标基因的“transcript variant 1, mRNA ”,没有1就用2、3，以此类推。因为是Q-PCR，所以要去掉内含子，因此用mRNA。
2、从上一个页面点击FASTA，可以看到mRNA的序列。
3、搜索“NCBI BLAST”并点击进入，可以看到如下界面，往下拉。
4、点击进入"Primer-BLAST"
5、从第二步的页面复制序列或者序列号，粘贴在第一个框里。修改产物长度，即“PCR product size”,一般为100-200之间最好。还要选择“Exon junction span”为“primer must span an exon-exon junction”,这是为了排除DNA污染。其它的参数都可以不改。
6、把网页往下拉到底，点击左下角的“Get Primers”，耐心等待几分钟，网页就会弹出设计好的引物。
7、最后一步就是选择引物了。要选择自我配对和互相配对度低，产物长度尽量小的等等。需要指出的是，要注意看引物对非目标基因的检测潜力，如果它对于目标基因相似基因扩出的产物长度与目标产物长度一样长，这个引物的非特异性就很强，不能要。
PCR过程，引物？
PCR的技术的主要步骤及PCR引物设计的一般原则分述如下： PCR的技术的主要步骤：
1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。
2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。
现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。 2、引物设计的基本原则 1、引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。
2、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。
ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。
3、引物内部不应出现互补序列。
4、两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。
5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。
6、引物3‘端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，最佳选择是G和C。
7、引物的5 ′端可以修饰。
如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。
到此，以上就是小编对于引物设计网站的问题就介绍到这了，希望介绍关于引物设计网站的5点解答对大家有用。
